[Detectieprincipe]

Dit product is een op multiplex fluorescerende sonde gebaseerd Taqman RT-qPCR-assaysysteem. De Taqman fluorescerende sonde is een specifiek oligonucleotide gebaseerd op een reporter-quencher-mechanisme. Voor elke probe is het 5'-uiteinde gelabeld met een fluorofoor, terwijl het 3'-uiteinde is gelabeld met een quencher. Wanneer de sonde intact is, wordt de fluorescentie die wordt uitgezonden door de fluorofoor geabsorbeerd door de quencher en wordt er geen fluorescentiesignaal gedetecteerd. Tijdens amplificatie van de matrijs zal de sonde echter worden afgebroken vanwege de 5'-3'-exonuclease-activiteit van Taq-DNA-polymerase, en de fluorescerende reporter en de quencher worden gesplitst en gescheiden, waarna een fluorescerend signaal kan worden gedetecteerd. Het genereren van elk moleculair amplicon gaat gepaard met het genereren van een fluorescerend signaal. Realtime monitoring van het gehele PCR-proces kan worden beoordeeld door de accumulatie van fluorescerende signalen te bewaken.

[Instrumenten]

Opmerking: kleurcompensatie is vereist voor Roche lightcycler480